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ELISA組織樣本處理方法
點(diǎn)擊次數(shù):1471 更新時(shí)間:2022-07-05

       用ELISA進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等,這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面就常見ELISA組織樣本處理方法的整理,希望對(duì)您有所幫助。

組織樣本一般是制成組織勻漿,處理方法如下:

1、取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿) ;

2、可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入 5-10ml預(yù)冷PBS(組織與 PBS 的質(zhì)量體積比建議為 1:5,即1g 樣本加入 5ml PBS)進(jìn)行充分研磨(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿),該過程需在冰上進(jìn)行;得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù) 2 次) 。

3、將制備好的勻漿液于5000×g 離心 5分鐘,留取上清即可檢測(cè)。

4、如果樣本需要長(zhǎng)期保存,請(qǐng)?zhí)砑拥鞍酌敢种苿8鶕?jù)實(shí)驗(yàn)需要,組織勻漿樣本可先定量總蛋白,以便于統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。某些組織樣本腎臟,腦組織會(huì)有假陽性反應(yīng)。處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要,尤其注意不要反復(fù)凍融,樣本處理之后可分裝密封保存, 4 度保存應(yīng)小于 1 周,-20 度不應(yīng)超過 1 個(gè)月,-80度不應(yīng)超過2個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。


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